LeapWal PolyShooter NEO-PEI DNA 轉(zhuǎn)染試劑 P09310 綜合了低的細胞毒性和高的轉(zhuǎn)染效率，讓更多細胞存活，且?guī)砩砩细嚓P(guān)的結(jié)果。而且，轉(zhuǎn)染步驟也相當簡單：只需用無血清培養(yǎng)基稀釋轉(zhuǎn)染試劑，與質(zhì)粒共同孵育，然后逐滴加入細胞中。研究人員所需的優(yōu)化少，當然，在轉(zhuǎn)染之前，你還是得優(yōu)化轉(zhuǎn)染試劑與DNA的比例。建議的比例是3:1，但對于特定研究，2:1至7:1的比例可能會提高轉(zhuǎn)染效率。
LeapWal PolyShooter NEO-PEI DNA 轉(zhuǎn)染試劑 P09310 步驟：
1.轉(zhuǎn)染前一天，胰酶消化細胞并計數(shù)，細胞鋪板，使其在轉(zhuǎn)染日密度為90-95%。細胞鋪板在2ml含血清，不含抗生素的正常生長的培養(yǎng)基中。
2.對于每孔細胞，使用250ul無血清培養(yǎng)基(如OPTI-MEMI培養(yǎng)基)稀釋4.0ugDNA，輕輕混勻。
3.使用前將Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染試劑輕輕混勻，用250ul無血清培養(yǎng)基(如OPTI-MEMI培養(yǎng)基)稀釋10ulLipofectamine2000轉(zhuǎn)染試劑，輕輕混勻。Lipofectamine2000稀釋后，在5分鐘內(nèi)同稀釋的DNA混合(<30分鐘)。NOTE：若使用DMEM培養(yǎng)基，則需在5分鐘內(nèi)同稀釋的DNA混合。
4.混合稀釋的DNA(第二步)和稀釋的Lipofectamine2000(第三步)。室溫放置20分鐘。
5.(optional)將6孔板中的舊營養(yǎng)液吸出，用無血清培養(yǎng)基清洗兩次。加入2ml無血清配養(yǎng)基。
6.直接將復合物加入到每孔中，搖動培養(yǎng)板，輕輕混勻。
7.在37℃，5%CO2中保溫24-48小時。無需去掉復合物或更換培養(yǎng)基。或者在4-5小時后更換培養(yǎng)生長基也不會降低轉(zhuǎn)染活性。
8.在細胞中加入復合物24-72小時后，分析細胞抽提物或進行原位細胞染色，檢測報告基因活性。這依賴于細胞類型和啟動子活性。對穩(wěn)定表達，在開始轉(zhuǎn)染一天后將細胞傳代至新鮮培養(yǎng)基中，兩天后加入篩選抗生素。進行穩(wěn)定表達需要數(shù)天或數(shù)周。
